合成生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù):大腸桿菌篇(牛福星) 版權(quán)信息
- ISBN:9787122458339
- 條形碼:9787122458339 ; 978-7-122-45833-9
- 裝幀:平裝
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合成生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù):大腸桿菌篇(牛福星) 本書特色
合成生物學(xué)以其“造物致知、造物致用”的理念快速發(fā)展,已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥、新材料、農(nóng)業(yè)、食品、環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域。目前世界上有超過60%的化學(xué)品可以被用于生物合成,掌握合成生物學(xué)技術(shù)精華是目前生物領(lǐng)域?qū)W者的必修課。本書從實(shí)驗(yàn)設(shè)計上對于初學(xué)者迅速入門具有巨大助益,同時有助于提高開設(shè)本門相關(guān)課程實(shí)驗(yàn)員及任課老師上課效率。
合成生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù):大腸桿菌篇(牛福星) 內(nèi)容簡介
合成生物學(xué)是生命科學(xué)發(fā)展過程中產(chǎn)生的一門綜合性學(xué)科。其基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)主要涉及基因工程、代謝調(diào)控、基因編輯等。本書就合成生物學(xué)研究常用實(shí)驗(yàn)對象——大腸桿菌進(jìn)行系統(tǒng)性實(shí)驗(yàn)設(shè)計。按照合成生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)流程:菌株的感受態(tài)制備、瓊脂糖凝膠的制備、核酸提取及驗(yàn)證、工具酶使用、載體構(gòu)建、陽性轉(zhuǎn)化子篩選、蛋白質(zhì)表達(dá)及鑒定以及基因編輯實(shí)驗(yàn)流程進(jìn)行編寫。同時設(shè)置了相關(guān)的思考題以幫助讀者進(jìn)一步了解該實(shí)驗(yàn)。
書中對每一個實(shí)驗(yàn)的原理進(jìn)行了清晰的描述,書中所展示的實(shí)驗(yàn)技術(shù)不同于傳統(tǒng)的分子生物學(xué)技術(shù),而是對數(shù)個博士實(shí)驗(yàn)常用技術(shù)改進(jìn)并總結(jié),包含更加便捷高效的實(shí)驗(yàn)技巧。本教材適合作為高等學(xué)校合成生物學(xué)、生物工程等專業(yè)的實(shí)驗(yàn)教材,也是初入合成生物學(xué)領(lǐng)域科研人員、教學(xué)工作人員不可多得的參考書。
合成生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù):大腸桿菌篇(牛福星) 目錄
**章 感受態(tài)細(xì)胞的快速制備及轉(zhuǎn)化 001**節(jié) 感受態(tài)細(xì)胞的化學(xué)法快速制備 003一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?003二、實(shí)驗(yàn)原理 003三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 004四、實(shí)驗(yàn)流程 004五、注意事項(xiàng) 005六、思考題 005第二節(jié) 利用熱激法制備的感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化 006一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?006二、實(shí)驗(yàn)原理 006三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 007四、實(shí)驗(yàn)流程 007五、注意事項(xiàng) 007**章 感受態(tài)細(xì)胞的快速制備及轉(zhuǎn)化 001**節(jié) 感受態(tài)細(xì)胞的化學(xué)法快速制備 003一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?003二、實(shí)驗(yàn)原理 003三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 004四、實(shí)驗(yàn)流程 004五、注意事項(xiàng) 005六、思考題 005第二節(jié) 利用熱激法制備的感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化 006一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?006二、實(shí)驗(yàn)原理 006三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 007四、實(shí)驗(yàn)流程 007五、注意事項(xiàng) 007六、思考題 008第三節(jié) 感受態(tài)細(xì)胞的電轉(zhuǎn)化法快速制備 009一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?009二、實(shí)驗(yàn)原理 009三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 009四、實(shí)驗(yàn)流程 010五、注意事項(xiàng) 010六、思考題 011第四節(jié) 利用電轉(zhuǎn)化法制備的感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化 012一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?012二、實(shí)驗(yàn)原理 012三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 013四、實(shí)驗(yàn)流程 013五、注意事項(xiàng) 013六、思考題 014
第二章 PCR 擴(kuò)增及瓊脂糖凝膠核酸電泳技術(shù) 015**節(jié) 常規(guī)PCR 技術(shù) 017一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?017二、實(shí)驗(yàn)原理 017三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 017四、實(shí)驗(yàn)流程 019五、注意事項(xiàng) 019六、思考題 020第二節(jié) 重疊延伸PCR 技術(shù) 021一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?021二、實(shí)驗(yàn)原理 021三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 021四、實(shí)驗(yàn)流程 023五、注意事項(xiàng) 023六、思考題 024第三節(jié) 定點(diǎn)突變PCR 技術(shù) 025一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?025二、實(shí)驗(yàn)原理 025三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 025四、實(shí)驗(yàn)流程 026五、注意事項(xiàng) 027六、思考題 028第四節(jié) 瓊脂糖凝膠核酸電泳技術(shù) 029一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?029二、實(shí)驗(yàn)原理 029三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 029四、實(shí)驗(yàn)流程 030五、注意事項(xiàng) 031六、思考題 032
第三章 DNA 提取 033**節(jié) 大腸桿菌基因組的提。C(jī)械破胞 柱法回收) 035一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?035二、實(shí)驗(yàn)原理 035三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 036四、實(shí)驗(yàn)流程 036五、注意事項(xiàng) 037六、思考題 037第二節(jié) 質(zhì)粒提。▔A裂解 柱回收法) 038一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?038二、實(shí)驗(yàn)原理 038三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 039四、實(shí)驗(yàn)流程 039五、注意事項(xiàng) 040六、思考題 041第三節(jié) PCR 產(chǎn)物回收(乙醇沉淀法) 042一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?042二、實(shí)驗(yàn)原理 042三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 042四、實(shí)驗(yàn)流程 043五、注意事項(xiàng) 043六、思考題 043第四節(jié) PCR 產(chǎn)物/ 酶切產(chǎn)物純化(柱提法) 044一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?044二、實(shí)驗(yàn)原理 044三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 044四、實(shí)驗(yàn)流程 045五、注意事項(xiàng) 046六、思考題 046
第四章 工具酶的使用以及載體構(gòu)建 047**節(jié) 限制性核酸酶(DpnⅠ)的使用 050一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?050二、實(shí)驗(yàn)原理 050三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 050四、實(shí)驗(yàn)流程 051五、注意事項(xiàng) 051六、思考題 052第二節(jié) 限制性核酸內(nèi)切酶的使用 053一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?053二、實(shí)驗(yàn)原理 053三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 053四、實(shí)驗(yàn)流程 054五、注意事項(xiàng) 055六、思考題 055第三節(jié) 連接酶的使用 056一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?056二、實(shí)驗(yàn)原理 056三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 056四、實(shí)驗(yàn)流程 057五、注意事項(xiàng) 057六、思考題 059第四節(jié) T 載體構(gòu)建 060一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?060二、實(shí)驗(yàn)原理 060三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 061四、實(shí)驗(yàn)流程 061五、注意事項(xiàng) 062六、思考題 062
第五章 陽性轉(zhuǎn)化子的篩選與鑒定 063**節(jié) 菌落PCR 鑒定 065一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?065二、實(shí)驗(yàn)原理 065三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 065四、實(shí)驗(yàn)流程 066五、注意事項(xiàng) 067六、思考題 067第二節(jié) 基于藍(lán)白斑篩選的載體構(gòu)建 068一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?068二、實(shí)驗(yàn)原理 068三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 068四、實(shí)驗(yàn)流程 069五、注意事項(xiàng) 070六、思考題 070第三節(jié) 基于熒光蛋白報告基因的載體構(gòu)建和鑒定 071一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?071二、實(shí)驗(yàn)原理 071三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 071四、實(shí)驗(yàn)流程 072五、注意事項(xiàng) 072六、思考題 073第四節(jié) 選取載體的重鑒定 074一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?074二、實(shí)驗(yàn)原理 074三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 074四、實(shí)驗(yàn)流程 075五、注意事項(xiàng) 076六、思考題 076
第六章 蛋白質(zhì)表達(dá)純化及鑒定 077**節(jié) 蛋白質(zhì)表達(dá) 079一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?079二、實(shí)驗(yàn)原理 079三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 079四、實(shí)驗(yàn)流程 080五、注意事項(xiàng) 080六、思考題 081第二節(jié) 細(xì)胞收集與破碎 082一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?082二、實(shí)驗(yàn)原理 082三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 082四、實(shí)驗(yàn)流程 083五、注意事項(xiàng) 084六、思考題 084第三節(jié) 蛋白質(zhì)純化 085一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?085二、實(shí)驗(yàn)原理 085三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 085四、實(shí)驗(yàn)流程 086五、注意事項(xiàng) 087六、思考題 088第四節(jié) SDS-PAGE 電泳 089一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?089二、實(shí)驗(yàn)原理 089三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 089四、實(shí)驗(yàn)流程 091五、注意事項(xiàng) 092六、思考題 093
第七章 CRISPR 技術(shù)應(yīng)用 095**節(jié) CRISPR 基因敲除 097一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?097二、實(shí)驗(yàn)原理 097三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 097四、實(shí)驗(yàn)流程 100五、注意事項(xiàng) 102六、思考題 103第二節(jié) CRISPR 基因敲除驗(yàn)證及質(zhì)粒去除 104一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?104二、實(shí)驗(yàn)原理 104三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 104四、實(shí)驗(yàn)流程 105五、注意事項(xiàng) 106六、思考題 107第三節(jié) CRISPR 基因抑制 108一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?108二、實(shí)驗(yàn)原理 108三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 108四、實(shí)驗(yàn)流程 109五、注意事項(xiàng) 110六、思考題 110第四節(jié) CRISPR 基因激活 111一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?111二、實(shí)驗(yàn)原理 111三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與設(shè)備 112四、實(shí)驗(yàn)流程 112五、注意事項(xiàng) 113六、思考題 114
附錄一 常用培養(yǎng)基配方 115
附錄二 常用限制性內(nèi)切酶 119
附錄三 思考題參考答案 123
參考文獻(xiàn) 139
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合成生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù):大腸桿菌篇(牛福星) 作者簡介
牛福星,副教授,2015.9-2018.7博士畢業(yè)于中山大學(xué),2018.8-2021.8于中山大學(xué)繼續(xù)從事博士后科研工作,主要從事合成生物學(xué)方向研究。目前主持在研國家自然科學(xué)基金地區(qū)項(xiàng)目1項(xiàng)(33萬),中央引導(dǎo)地方科技發(fā)展專項(xiàng)1項(xiàng)(50萬),廣西科技計劃項(xiàng)目1項(xiàng)(10萬),廣西科技大學(xué)3331人才項(xiàng)目1項(xiàng)(100萬)。近五年主持完成省部級資金來源項(xiàng)目3項(xiàng),參與國家重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目1項(xiàng)(341萬)。目前擔(dān)任廣西科技大學(xué)生化學(xué)院生工系主任、廣西科技評審專家,廣西科協(xié)智庫專家;廣西微生物學(xué)會理事等職務(wù);同時為Journal of Agricultural and Food Chemistry、Frontiersin Microbiology、Scientific Reports、Frontiers in Bioengineering and Biotechnology等國際期刊審稿工作。目前主講本科基因工程實(shí)驗(yàn)課程,發(fā)酵工程、生物分離工程專業(yè)必修課程,以及研究生代謝控制發(fā)酵、微生物工藝實(shí)驗(yàn)課程。